PCR實(shí)驗(yàn)室

又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱(chēng)。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DN***段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級(jí)別，精確檢測(cè)乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時(shí)判斷病人最適合使用哪類(lèi)抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗(yàn)依據(jù)。

PCR實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)--設(shè)計(jì)要點(diǎn)

主體結(jié)構(gòu)

目前實(shí)驗(yàn)室的主體多為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽(yáng)角均采用鋁合金R50內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問(wèn)題。并且彩鋼板結(jié)構(gòu)牢固，線條簡(jiǎn)明，美觀大方，密封性好。

標(biāo)準(zhǔn)四區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)

將PCR過(guò)程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增區(qū)及產(chǎn)物分析檢測(cè)區(qū)四個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)區(qū)。整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立試驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時(shí)各區(qū)通過(guò)氣壓調(diào)節(jié)，使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。

消毒

在四個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)和四個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳遞窗內(nèi)部安裝紫外線燈，供消毒用。在試劑準(zhǔn)備區(qū)還設(shè)置移動(dòng)紫外線燈對(duì)實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒。

機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗

試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過(guò)程中不受污染（人物分流）。

地面

地面建議使用PVC卷材地面或自流平地面，整體性好。便于進(jìn)行清掃，耐腐蝕。沒(méi)有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm*800mm）接縫需小于2mm。

PCR實(shí)驗(yàn)室平面規(guī)劃圖

標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)--空氣流和壓差要求

▅ PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向必須嚴(yán)格按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備去→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進(jìn)行，防止擴(kuò)增產(chǎn)物空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。

▅ 空氣潔凈級(jí)別不同的的相鄰的房間之間中的靜壓差大于5帕，潔凈室（區(qū)）與室外大氣的靜壓差應(yīng)大于10帕，應(yīng)配備監(jiān)測(cè)靜壓的設(shè)備，并定期監(jiān)控。

標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)--潔凈裝修要求

▅ 潔凈室（區(qū)）的內(nèi)表面應(yīng)平整光滑、無(wú)裂縫、借口嚴(yán)密、無(wú)顆粒物脫落，并能耐受清洗和消毒，墻壁與地面的交界處宜成弧形或采取其他措施，以減少灰塵積聚和便于清潔。

▅ 潔凈室（區(qū)）內(nèi)各種管道、燈具、風(fēng)口以及其他公用設(shè)施，在設(shè)計(jì)和安裝時(shí)應(yīng)考慮使用中避免出現(xiàn)不易清潔的部位。

▅ 潔凈室（區(qū)）的窗戶、天棚及進(jìn)入室內(nèi)的管道、風(fēng)口、燈具與墻壁或天棚的連接部位均應(yīng)密封。

PCR實(shí)驗(yàn)室基本由五大結(jié)構(gòu)組成，常見(jiàn)為：pcr走廊、準(zhǔn)備區(qū)、制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增分析區(qū)。

▅ 準(zhǔn)備區(qū)

實(shí)驗(yàn)所需試劑的準(zhǔn)備工作，分裝等，由傳遞窗運(yùn)送至制備區(qū)，嚴(yán)謹(jǐn)走人員通道。

▅ 制備區(qū)

主要進(jìn)行樣品等保存，rna\dna的提取、貯存和其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定rna\dna的合成。

▅ 擴(kuò)增區(qū)

dna的擴(kuò)增，以制備的dna模版和合成的cDNA的加入和主板反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液等也可在擴(kuò)增區(qū)內(nèi)進(jìn)行，在巢式pcr測(cè)定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高等污染危害性，第二次加樣必須在本區(qū)完成。

▅ 擴(kuò)增分析

主要用來(lái)做擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定，本區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此必須主意避免通過(guò)本區(qū)的物品或者工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。